1.培养枯草芽孢杆菌：取亲本菌株T4412和TT2的新鲜斜面，放入装有液体完全培养基(CM)的试管中，36振荡培养14小时，将每株菌的1毫升菌液转移到装有20毫升液体完全培养基的250毫升锥形瓶中，36振荡培养3小时，使细胞生长到对数前期，加入25u/毫升青霉素，使其浓度为0.3u/。枯草芽孢杆菌厂家

2.收集细胞：取10毫升菌液，以4000转/分钟离心10分钟，弃去上清液，将枯草芽孢杆菌细菌悬浮于磷酸盐缓冲液中，离心。用这种方法洗两次，将细菌悬浮在10毫升的水中，每毫升含有约108，109个活细菌。枯草芽孢杆菌厂家

3.细菌总数的测定：每份取0.5毫升细菌溶液，枯草芽孢杆菌用生理盐水稀释，取1毫升10-5、10-6和10-7(每次稀释用两个平板)，倒入完整的培养基，培养36小时后计数。这是未经酶处理的细菌总数。枯草芽孢杆菌厂家

4.分离壁：枯草芽孢杆菌从两个亲本菌株中取出5mL菌悬液，加入浓度为100微克/毫升的5mL溶菌酶溶液，混合均匀，在36个水浴中保温30分钟，定期取样，通过显微镜检查观察原生质体的形成，当95%以上的细胞变成球形原生质体时，以4000转/分钟离心10分钟，弃去上清。枯草芽孢杆菌厂家

5.剩余菌数的测定：取原生质体悬液0.5mL，用无菌水稀释，枯草芽孢杆菌使原生质体裂死。取0.1毫升10-2、10-3和10-4稀释液，铺在完整的培养基平板上，培养2448小时。生长的菌落应该是未被酶裂解的剩余细胞。计算酶处理后的剩余细胞数，并分别计算两亲本菌株的原生质体形成率。原生质体形成率：未经酶处理的细菌总数——酶处理后剩余细胞数。枯草芽孢杆菌厂家